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支原体污染解决方案, 给细胞更多的安全与保护

什么是支原体?

 

支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径 0.2μm)并独立生活的微生物,没有细胞壁,表面由胞质膜构成,约有 1%的支原体可通过滤菌器。支原体污染细胞后,培养液可不发生混浊,多数情况下细胞病理变化轻微或不显著。细微变化也可由于传代、换液而缓解,因此易被忽视。但个别严重者,可致细胞增殖缓慢,甚至从培养器皿脱落。支原体污染细胞后会影响下游试验结果。

 

 

为什么要重视细胞培养中的支原体污染?

 

1、污染率高:在细胞研究领域,支原体是臭名昭著的污染源,二十世纪九十年代的支原体污染率是四分之一,而目前有仍然有超过十分之一的基因表达研究(许多曾发表在顶尖杂志上),表现出支原体污染的迹象;

 

2、影响日趋严重:虽然支原体污染并不一定意味着研究结果无效,但它会影响数百个基因的表达,并与细胞竞争营养阻碍细胞的生长。在目前测试的一组受污染的数据中(淋巴瘤细胞),已经鉴定出 61 个被支原体改变的基因,干扰了实验结果。这无疑是对时间,资源,经费很大的浪费;

 

3、难察觉:支原体污染完全是不留痕迹的,污染后的细胞生长速率一般并未发生显著的影响,无法用肉眼识别,除非采用专门的支原体检测方法检测;

 

4、污染源多:草率操作、细胞系流通的交叉污染、操作人员自身都是很重要的污染源;

 

5、难去除:支原体体积小,无细胞壁,约有 1%的支原体可通过过滤器,且一般抗生素根本无法有效抑制或者去除支原体,另外,部分抗生素使用后会对细胞产生敏感效果,从而影响细胞的状态;

 

6、重视程度日益增加:学术杂志发表实验结果需验证支原体污染影响,在国际上,支原体污染检测已经日益成为细胞培养污染常规检测之一,同时也是有效规避支原体污染的重要方法之一。

 

世界性难题!!!!Nature 収布癿文献表明细胞研究领域中存在严重支原体污染问题

Ewen Callaway. Contamination hits cell work. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a

 

如何保护细胞细胞不受支原体的污染?

 

西美杰代理的德国 PanReac Applichem 所提供 Myco 系列支原体清除产品可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性,从而有效地清除支原体污染,而且没有细胞毒性。另有支原体检测与预防系列产品可以给细胞提供更多的安全保护。

 

 

一、AppliChem 支原体清除系列

 

对于普通细胞系,遭受污染以后可以通过重新复苏,购买等途径更换样本,但是对于一些较难获得的珍贵样本,如干细胞,原代细胞,经过特殊处理的,或订购困难的细胞,一旦遭受支原体污染后,一定要马上进行处理。AppliChem研发的支原体清除的 Myco 系列产品,可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性,从而有效的清除支原体污染,并可以针对不同程度,不同细胞样本进行针对性处理,处理过程简单,对细胞不会造成任何副作用。

名称

主要成分

适用样本

使用斱法

Myco-3

(货号 A5240

环丙沙星

贴壁细胞,可清除大多数支原体污染

100 倍稀释加入培养基,每 2-3 天换液,连续处理14天

Myco-1

(货号 A5222

泰妙菌素

贴壁细胞,配合能解决顽固型支原体或者使用 Myco-3 处理停用后又出现支原体污染的情况

100 倍稀释加入培养基,与 Myco-2 配合使用。使用 Myco-1 处理 4 天后换 Myco-2 处理 3 天,如此重复 2-3 次即可

Myco-2

(货号 A5233

二甲胺四环素

 

 

二、AppliChem 细胞污染预防系列

 


有效保护细胞的最好方式是对于细胞培养环境的预防,如工作环境定期消毒处理,严格实验操作,保证器皿无菌等各方面。在实验室中,CO2 培养箱,CO2 培养箱水盘,水浴锅是非常重要的污染源。AppliChem 研发有系列污染预防系列产品专门针对这 3 大污染源,可有效预防真菌(及芽孢)、细菌、病毒等污染。使用方便,无腐蚀性,安全高效。

 

名称

适用环境

预防微生物

使用斱法

Incubator-Clean

(货号 A5230

CO2 培养箱, 工作台等

支原体,真菌及芽孢、细菌、病毒(包拪 HIVHBV 等)

即用型,喷雾处理完全湿润即可,无需转移出细胞,建议每 2 周处理一次

Incuwater-Clean

(货号 A5219

C02 培养箱水盘

支原体,真菌及芽孢、细菌、病

毒(包拪 HIVHBV 等)

100 稀释加入水盘灭菌水中,建议每 2-4 周更换灭菌水

Aquabator-Clean

(货号 A9390

水浴锅

细菌,真菌

100 稀释加入水浴锅,建议每 1-2 周吐水浴锅加入一次,每 4-6 周给水浴锅更换一次水

 

 

三、Applichem 支原体检测系列

 

传统的支原体检测方法包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、DNA 荧光染色检测以及 PCR 检测,除 PCR 检测方法以外,其他检测方法大多耗时长,要求检测人员具有丰富的经验,并且无法获得足够的灵敏度和特异性,对于一些稀有的支原体亚种无法有效检测。

 

AppliChem 设计的支原体检测试剂盒系列产品均是基于 PCR 方法,根据支原体 16S rRNA 保守序列设计引物,经过 PCR 反应扩增其 16S rRNA 片段,后采用琼脂糖电泳方法检测 270bp 条带。相对传统方法而言,具有强大优势:

 

  • 高灵敏度:敏感度高达 100~1000CFU/ml,仅需  要 0.5 - 1.0 ml 细胞上清样本即可检测;
  • 检测品种广泛:可检测常规品种,同时对于稀有  亚 种 也 能 同 效 检 测 , 如 M. pneumoniae,  Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis,M.bovis,几乎覆盖自然界 80 余个品种;
  • 快速:操作时间只需 30 分钟,全程 5 个小时内  即可得到检测结果;
  • 可靠:试剂盒中包括有阳性对照 DNA,可保证  实验结果的可重复性,减小因操作带来的误差;
  • 安全性:无支原体培养过程,有效避免污染扩大。


 


 

 

产品型号

检测方法

适用仪器

试剂盒组分

PCR Mycoplasma Test Kit

货号 A3744

普通 PCR-电泳检测

普通 PCR 仪器

Reaction Mix Buffer Solution

Positive Template Control

qPCR Mycoplasma Test Kit

货号 A9019

荧光定量 PCR

LightCycler®1.2, 1.5, 2.0, 480, Rotor-Gene™ 3000, 6000, ABI Prism® 7000, iCycler iQ®, iQ™5, Opticon 2, Chromo 4, MX300P®, MX4000®.

Primer/Probe/Nucleotide Mix(RED) Rehydration Buffer(BLUE)

Positive Control DNA(GREEN) Internal Control DNA(YELLOW) PCR Grade Water(WHITE)


西美杰是PanReac Applichem 中国总代理,为用户提供完善的技术支持与售后服务。如对产品感兴趣欢迎拨打西美杰客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多信息。

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